外泌体提取和检测服务

外泌体是直径30--150nm的囊泡结构，内含蛋白质、RNA等成分，一般从血液、唾液、乳汁、尿液和细胞中可以分离得到大量的外泌体。植物来源的外泌体研究，也是当前的研究、应用热点之一。

外泌体的检测方法一般包括：浓度和粒径检测、电镜检测、和WB检测。外泌体的电镜结构是茶托状或一侧凹陷的球状结构，不同样本来源的外泌体形态会有差异。样本以超速离心法提取的外泌体为佳。

外泌体的提取方法有：超速离心法、梯度密度离心法、沉淀试剂盒、凝胶排阻分离法、膜亲和试剂盒等。

外泌体鉴定：NTA粒径、透射电镜、western blot、流式检测

NTA服务简介

实验室采用Zetaview（品牌：Particle Metrix）进行外泌体浓度粒径测试服务。其方法是纳米颗粒跟踪分析（Nanoparticle Tracking Analysis，NTA）；原理是对每个颗粒的布朗运动进行追踪和分析，结合Stockes-Einstein方程式计算出纳米颗粒的流体力学直径和浓度。NTA技术已被外泌体研究领域认可为外泌体表征手段之一；相较于其他表征方式，NTA技术的样本处理更简单、更能保证外泌体原始状态、检测速度更快。Zetaview包含的微电泳技术，也可进行zeta电位的检测。

目前配备为488nm波长的激光器，且搭配对应的滤光片，可以测量荧光抗体标记的外泌体。

样本送样要求：生物样本应避免反复冻融，尽量用干冰发样本，可混冰袋发货。如果收集样本需要一段时间，建议-80°保存样本，干冰发货.

外泌体服务项目：

外泌体抽提、纯化(1 个样) ，周期3-5个工作日：植物/菌液/细胞培养液样本的公斤级、升级的外泌体提纯服务
粒径、浓度检测-NanoFCM (1个样)，周期3-5个工作日
粒径检测-NTA (1个样)，周期3-5个工作日
粒径检测-NTA+Zeta电位检测，周期3-5个工作日
电镜检测(1个样，5-15张电镜照片，按要求定制拍照)，周期5-10个工作日
外泌体蛋白浓度测定(BCA法)，周期3-5个工作日
外泌体表面蛋白NanoFCM流式检测-单marker (限CD9/CD81/CD63，使用公司抗体)，周期8-12个工作日
WB检测（CD9,CD63,CD81,TSG101,HSP70,Calexin 可以任选3个指标，使用公司抗体），周期15个工作日。WB检测，可以使用公司的人和小鼠抗体，也可以客户自行提供抗体。


外泌体样本送样要求

一、外泌体样本NTA检测
1.提供外泌体悬液即可，未纯化样本也可以上机检测；
注意：NTA仅提供粒径分布情况和颗粒浓度，无法区分外泌体与非外泌体成分；当然也可先利用外泌体特异性标记物进行荧光标记，则可以获知外泌体特定亚群的含量。
2.仪器的最佳检测区间是10^7 particles/ml，且有浓度检测下限，为10^5 particles/ml，进样量不少于2ml；一般来说，会对样本稀释后进样；
我司无法准确建议送样量；检测需要量与样本本身浓度有关，样本浓，则用量小，反之则多（如果有全蛋白量数据可联系我司给建议送样量），根据检测经验，样本取用量一般在2µl-100µl不等，取用量大于50µl时大多由于样本分泌量过低、提取失败或者对样本有过多稀释。一般建议送样量不低于30µl，如样本珍贵，可联系我司寄回，运费视具体情况收取。

二、外泌体样本电镜（TEM）检测
透射电镜检测样本，需要不少于30ul纯化后的外泌体。

外泌体透射电镜扫描照片参考图

透射电镜

三、外泌体样本WB检测
外泌体样本WB检测，一张膜可以做7个样本；每个样本3个指标都测的话，需要不少于150ul纯化后的外泌体。

四、送样方式：
新鲜样本，可以冰袋寄送样本；冷冻样本，建议干冰寄送
外泌检测项目，送样时辛苦老师们提供一下细胞种类、样本来源（如血清）、外泌体提取方式（如未纯化、超速离心法、密度梯度离心法、超滤法，用某个品牌试剂盒提取或者其他方法）、样本体积、样本编号。方便收到样本后进行核对、以及实验室安排检测。

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